電泳儀、電泳槽的使用方法

tags:    時間:2014-03-11 18:40:37
電泳儀、電泳槽的使用方法簡介
    電泳儀:電泳技術是分子生物學研究不可缺少的重要分析手段。電泳一般分為自由界面電泳和區帶電泳兩大類,自由界面電泳不需支持物,如等電聚焦電泳、等速電泳、密度……
電泳儀、電泳槽的使用方法正文
    
電泳儀:電泳技術是分子生物學研究不可缺少的重要分析手段。電泳一般分為自由界面電泳和區帶電泳兩大類,自由界面電泳不需支持物,如等電聚焦電泳、等速電泳、密度梯度電泳及顯微電泳等,這類電泳目前已很少使用。而區帶電泳則需用各種類型的物質作為支持物,常用的支持物有濾紙、醋酸纖維薄膜、非凝膠性支持物、凝膠性支持物及硅膠-G薄層等,分子生物學領域中最常用的是瓊脂糖凝膠電泳。所謂電泳,是指帶電粒子在電場中的運動,不同物質由於所帶電荷及分子量的不同,因此在電場中運動速度不同,根據這一特徵,應用電泳法便可以對不同物質進行定性或定量分析,或將一定混合物進行組份分析或單個組份提取製備,這在臨床檢驗或實驗研究中具有極其重要的意義。電泳儀正是基於上述原理設計製造的。下面簡單介紹其使用方法及注意事項。
● 使用方法
1. 首先用導線將電泳槽的兩個電極與電泳儀的直流輸出端聯接,注意極性不要接反。
2. 電泳儀電源開關調至關的位置,電壓旋鈕轉到最小,根據工作需要選擇穩壓穩流方式及電壓電流範圍。
3. 接通電源,緩緩旋轉電壓調節鈕直到達到的所需電壓為止,設定電泳終止時間,此時電泳即開始進行。
4. 工作完畢后,應將各旋鈕、開關旋至零位或關閉狀態,並撥出電泳插頭。
注意事項
1. 電泳儀通電進入工作狀態后,禁止人體接觸電極、電泳物及其它可能帶電部分,也不能到電泳槽內取放東西,如需要應先斷電,以免觸電。同時要求儀器必須有良好接地端,以防漏電。
2. 儀器通電后,不要臨時增加或撥除輸出導線插頭,以防短路現象發生,雖然儀器內部附設有保險絲,但短路現象仍有可能導致儀器損壞。
3. 由於不同介質支持物的電阻值不同,電泳時所通過的電流量也不同,其泳動速度及泳至終點所需時間也不同,故不同介質支持物的電泳不要同時在同一電泳儀上進行。
4. 在總電流不超過儀器額定電流時(最大電流範圍),可以多槽關聯使用,但要注意不能超載,否則容易影響儀器壽命。
5. 某些特殊情況下需檢查儀器電泳輸入情況時,允許在穩壓狀態下空載開機,但在穩流狀態下必須先接好負載再開機,否則電壓表指針將大幅度跳動,容易造成不必要的人為機器損壞。
6. 使用過程中發現異常現象,如較大噪音、放電或異常氣味,須立即切斷電源,進行檢修,以免發生意外事故。

夾芯式垂直電泳槽使用方法:
一、組成部件
(一)裝有鉑金絲的貯液槽一對,配有冷卻裝置及電泳緩衝液流出口。
(二)凹型橡膠框,配有玻璃板,可分別製作厚度為lmm、1.5mm的凝膠板,操作時根據需要選擇適當厚度的玻璃板及梳子配套使用。
(三)樣品孔模具(梳子)用於電泳加樣。
(四)固定貯液槽的螺絲桿及螺母4對,28D、30型為5對。
(五)橡膠管五根。兩根長的用於連接冷卻水的出入口;中等長度的兩根用於連接電極緩;中液的流出口;最短的一根用於連接貯液槽間的冷卻水。
(六)導線1付。
● 二、使用方法
(一)清洗部件
上述部件組裝前要徹底清洗乾淨。尤其是玻璃板及凹形帶槽橡膠框,必須用泡沫海綿沾少許肥皂粉或洗滌劑徹底清洗乾淨。清洗后的玻璃板應放在玻璃板支架上晾乾水後方能使用。
(二)組裝電泳槽
A、1、將四隻固定螺桿插進一隻貯液框(半上槽)的相應孔洞中,然後將貯液框仰放在桌上。
2、左手拿凹型槽橡膠模框,右手的拇指與中指握住玻璃板的兩側邊緣插到橡膠模框內 (注意手指不能接觸灌膠面的玻璃板)。
3、將帶有玻璃的橡膠模框子放在仰放的貯液槽框架上,其下緣必須對齊貯液槽框下緣。
4、雙手拿另一隻貯液槽框與仰放在桌上的貯液槽框相合,並使橡膠框上的凸出線位於貯液槽有機玻璃框中央。
5、裝上四隻螺母,擰緊螺絲。注意擰緊螺絲時用力應均勻,最好用雙手按斜角位置雙雙逐漸擰緊。
6、將電泳槽垂直豎起,放在桌上,帶短玻璃板的貯液槽稱上槽(陰極端),帶長玻璃板的貯液槽稱為下槽(陽極端),在長玻璃板與橡膠框間有一縫隙。此縫隙可用已熔化的10%瓊脂沿長玻璃板下端灌入,為防止留存氣泡,可稍抬起一端即可趕去氣泡。待瓊脂完全凝固后才能灌膠。
B、也可將槽垂直豎起,將帶有玻璃的橡膠模框直接放入槽中,對稱擰緊螺絲后,用瓊脂封底邊。
(三)灌膠
1、先灌分離膠,待凝固后再灌濃縮膠。灌膠前接通冷卻水,夾緊連接上下貯液槽的兩根橡膠管。
2、用細頭滴管吸取膠液,沿長、短玻璃板中間縫隙從一端加入膠液。為防止產生氣泡,可稍拾起另一端(氣泡往高處走),不斷加入膠液。若單層膠(分離膠)則加膠量約距離短玻璃板上端0.3厘米處,輕輕加少許水,雙手輕輕將梳子插入,待膠凝后就可形成凹形加樣孔。
3、為防止漏膠,在上、下貯液槽中立即加入蒸餾水,但蒸餾水不能超過短玻璃板上緣。
4、膠凝固后即可看到樣品槽梳子與凝膠板間有一層折
射率不同的亮區。
(四)加樣
1、鬆開連接上、下貯液槽兩根橡皮管上的夾子,放掉槽內的蒸餾水,待水流完后,再夾緊夾子。
2、雙手輕輕取出樣品梳子,即可看到界線清楚的加樣孔,將孔中水分吸去(注意千萬不要碰壞孔沿的字面)。
3、在上、下貯液槽中加入緩;中液,液體高度應超過上貯液槽短玻璃板上緣。
4、用微量注射器吸取一定量的樣品加到長、短玻璃板間的凹型凝膠樣品孔內(注意加樣動作要輕,針頭不能碰壞膠面)。
(五)電泳
一貯液槽導線與電泳儀的負極相連,下貯液槽導線與電泳儀的正極相連。檢查線路無誤,方可按照所要求的電壓電流進行電泳。
(六)取出膠板
電泳結束,旋松螺母,取出膠框,剝出玻璃板,在兩塊玻璃板下角空隙內,用刀片背面輕輕撬動,即可將膠面與一塊玻璃板分開,將有膠板的玻璃板平放在桌上,雙手輕輕沿凝膠底將膠片托起,放在大培養皿中染色,膠板經漂洗、脫色后即可看到清晰的分離條帶。
註:DYCZ—28B、29型夾芯式電泳槽使用方法與此相同。DYCZ—28C型、28D型和30型電泳槽使用方法也與此相同,因是製作兩塊膠板,故實際形成三個貯液槽。請注意在操作時兩個膠室的短玻璃板都要向里,中間為負極,兩邊為正極。
注意.可作兩塊膠的電泳槽,在作一塊膠時,應將三頭導線都插在電泳槽上,以免放在桌上誤碰。
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