微型瓊脂糖凝膠電泳槽的簡易製作

tags:    時間:2014-03-11 18:43:13
微型瓊脂糖凝膠電泳槽的簡易製作簡介
    摘要以有機玻璃板等材料,製作出成奉低廉的微型瓊脂糖凝膠電泳槽。經試用,具有操作簡便、使用安全、節省試劑等優點,能滿足教學與科研的需要。   瓊……
微型瓊脂糖凝膠電泳槽的簡易製作正文
    
摘要
以有機玻璃板等材料,製作出成奉低廉的微型瓊脂糖凝膠電泳槽。經試用,具有操作簡便、使用安全、節省試劑等優點,能滿足教學與科研的需要。
 
瓊脂糖凝膠電泳是核酸研究工作中必不可少的工具,在生物化學和分子生物學教學和科研中具有重要作用。瓊脂糖凝膠電泳槽的製作原理雖簡單,但由於瓊脂糖凝膠電泳槽梳子的製作工藝較複雜,且鉑金電極價格較高,使目前市場上商品化的瓊脂糖凝膠電泳槽價格較高。

本文作者對瓊脂糖凝膠電泳技術進行了研究,完成了微型瓊脂糖凝膠電泳槽的改進位作。製作出的瓊脂糖凝膠電泳槽具有成本低、檢測迅速、使用安全、節省試劑、電泳譜帶清晰等優點,能滿足生物化學和分子生物學教學實驗的需要,並已在核酸酶切研究中得到進一步應用。
 
1 製作方法
瓊脂糖凝膠電泳槽的製作分為4部分:電泳槽的製作;制膠槽的製作;梳子的製作和蓋子的製作。制膠槽和梳子在數量和規格上可以根據實際工作需要適量增減,以便於實驗操作。

1.1 電泳槽的製作
選取透明的有機玻璃盒或塑料盒,大小以120mm×lO0mm×50mm左右為佳。在盒子兩端同側各打一孔裝上電極插孔,並在兩端部各用膠布固定一根細銅絲(膠布只在盒子的角部固定銅絲),即製成瓊脂糖凝膠電泳槽。見圖1。
 
1.2 制膠槽的製作
截取2 3一厚的透明有機玻璃板,在電熱絲上加熱,折成「u」形,即成制膠槽。制膠槽兩側板高度以20—25mm為宜。間距應略小於電泳槽;制膠槽的長度約為70—90mm 。見圖1。
 
1、3 盞子的製作
用有機玻璃做一「L 形上蓋,並在電極插孔的相應位置上打孔,安裝電極插頭,並將插頭固定於上蓋的倒板上。見圖2。
 
1.4 梳子的製作
選取厚度適宜(1-2m )的透明有機玻璃板,截成(3-5)mm×30mm的窄條,用於梳齒的製作。窄條的邊要光滑。以使制出的加樣孔比較整齊。取兩塊lO0mm×15mm有機玻璃板,分別折成「L』,形(長lOOmm,一側寬5mm,另一側寬10mm)。將兩塊折成「L」形的有機玻璃板5mm寬一側相對,橫跨於制膠槽上,在制膠槽的底面墊上1—1.5zr~m厚的有機玻璃薄板,將制好的窄條以2-3mm的間距分別平行固定於兩根「L」形板條的5mm寬一倒,窄條下端應整齊地落在墊板上,(注意:兩側窄條與制膠槽應保持2—3mm的間距。)用氯仿固定。
 
 
 
2 使用方法
(1)將制膠槽兩端用膠布封好,以純水檢測是否封嚴;
(2)在合適的位置放好梳子;
(3)加入制好的瓊脂糖製成凝膠;
(4)去掉梳子和膠布,將制膠槽放入電泳槽中:
(5)在一側緩緩加人電泳緩衝液,至液面高於膠面lmm;
(6)接通電源,在100~150V電泳,20min后檢測、觀察電泳結果。
 
3 電泳槽性能
用本文方法製作的瓊脂糖凝膠電泳槽具有以下優點:
(1)成本低。總成本約為l0—20元,是同類市場商品的1/20。
(2)能節約電泳緩衝液用量,一次僅需要160mL左右。
(3)電泳檢測迅速,採用100~150V電壓,20min即可得到檢測結果。
(4)電泳槽各部件可以互換使用,便於維修。
(5)梳子位置可以隨意調整,使用方便。
(6)凝膠取出方便,並可在制膠槽中直接進行檢測。
(7)打開電泳槽蓋子時自動斷電,可保證安全。
 
4 應用
該裝置已在生物化學實驗和分子生物學實驗中試用,在質粒DNA的分離檢測、DNA酶切片段的電泳檢測、連接酶連接結果檢測、重組質粒檢測等教學實驗中.均取得很好的實驗結果。通常的瓊脂糖凝膠電泳槽在製作中常使用價格較高的鉑金絲電極,本文裝置利用銅絲代替鉑金絲,能滿足實驗需要.並可大幅度降低成本。但應注意在使用過程中需及時更換銅絲。本裝置成本低、電泳緩衝液用量少,適用於科研和教學經費不足、用量又很大的單位。

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