介紹一種改良的冷卻裝置的垂直板電泳槽

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tags:    時間:2014-03-11 18:40:27
介紹一種改良的冷卻裝置的垂直板電泳槽簡介
    本文介紹一種改良的帶冷卻裝置的浸入式垂直板電泳槽。用不會變形的有機玻璃製作固定架及控制凝膠厚度的隔條,以代替市售的可壓縮的U形橡膠套。以螺絲固定玻璃板。……
介紹一種改良的冷卻裝置的垂直板電泳槽正文
    
本文介紹一種改良的帶冷卻裝置的浸入式垂直板電泳槽。用不會變形的有機玻璃製作固定架及控制凝膠厚度的隔條,以代替市售的可壓縮的U形橡膠套。以螺絲固定玻璃板。用醫用硅膠管密封以完全分隔正負極電泳緩衝液。經試用於蛋白質及核酸電泳,效果甚佳。
 
電泳是生物化學和分子生物學實驗分析的最常用手段之一,電泳時常要求在某一恆定溫度中進行,雖然有各種性能不同的帶恆溫冷卻裝置的進口電泳槽,但價格昂貴,每台數千至萬元以上。國產的垂直板電泳槽雖亦有帶冷卻裝置的,但製備的膠板的厚度一般只有三種,不能隨意調整,且常常因為梳的厚度與橡膠套隔片的厚度不一致而致上樣孔內有殘留凝膠,影響上樣及電泳效果。而且,橡膠隔片的厚度受固定兩半槽時旋轉螺絲鬆緊程度的影響。為此,在工作中我們參考多種現有垂直電泳槽的樣式,自行設計了一種浸入式垂直板電泳槽,簡單、價廉而效果良好。
 
1 電泳槽的製作

電泳槽的式樣見附圖。整個槽由有機玻璃粘合而成,外殼為一個矩形槽,大小為90×150×230cm(可根據需要適當縮小),中間設置一個固定架,用以固定玻璃板並分隔電泳槽為正負極。固定架的具體構造是:在短形槽的左右兩側壁中部的全長上,各粘合兩片寬20mm、長230arm、厚5mm以上的有機玻璃片,兩片相距20mm。前面兩片各鑽三個有羅紋的孔,後面兩片的底部由一高15mm的有機玻璃長條相連,成一整塊,呈u形,且與槽底牯合,不漏液體。
 
2 安裝及灌膠
安裝玻琉板灌膠時,把電泳槽平卧,固定架上有孔的有機玻璃片朝上,u形架在下。在U形架的上面放一醫用硅膠管,亦使變成u形,其上放一210×150mm大小的玻璃板,板的底部伸入至電泳槽底部,板上兩側放兩片隔片,各10-15×230mm,厚度隨電泳時所需凝膠的厚度而定。隔條上再放一塊玻璃板,大小225×150mm,板的底部離電泳槽底部3mm左右。最後,在固定架的羅紋孔上放上塑料螺絲,並逐漸旋緊,此時,硅膠管逐漸被壓扁、壓緊,兩玻璃板亦被固定,整個電泳槽被分成前後兩個槽:前槽為正極,后槽為負極。兩槽分別放置玻璃彎管,通入恆溫水,即可維持電泳緩衝液及浸於其中的凝膠溫度的恆定。灌聚丙烯醯胺凝膠時,玻璃板底部用瓊脂糖凝膠封好,或用其它方法密封,然後如常灌膠,加梳。
 
3 討論
浸入式垂直板電泳槽的優點是緩衝液槽中裝有恆溫冷卻水裝置,使電泳緩衝液能保持在某一設定溫度,而電泳凝膠板浸在緩衝液內,電泳時凝膠產生的熱量被緩衝液帶走,從而使電泳能在恆定溫度下進行。因此電泳效果比不帶恆溫裝置的電泳槽要好。市面銷售的國產垂直板夾心冷卻式電泳槽雖有上述優點,但因凝膠板的厚度由橡膠隔條的厚度決定,後者隨固定力量的大小而略有改變;更有甚者,橡膠隔條的厚度與所配的有齒梳的厚度常略有差別,一般是有齒梳略薄一些,這樣,灌制好的凝膠的上樣孔內常有少量殘留凝膠,使所加樣品不整齊,嚴重影響電泳效果。有鑒於此,我們設計了上述電泳槽,灌制聚丙烯醯胺凝膠板時,凝膠厚度由有機玻璃或其他塑料做的隔條來控制,而有齒梳和隔條可用同一塊板切割而成,因此厚度均勻,上樣孔生成良好,隨意選用不同厚度的板做隔條和梳,即可製備不同厚度的凝膠板。
 
我們採用旋緊螺絲以固定並壓緊玻璃板和隔條,灌制凝膠板時不會漏液體,同時在較低的一塊玻璃板的後面三邊放置一彈性良好的硅膠管,這樣,旋緊螺絲的同時亦壓緊硅膠管而把兩緩衝液槽完全隔開並密封,電泳時不會發生短路。上述裝置,經試用於蛋白質電泳和DNA的單鏈構像多態性(SSCP)分析,效果甚佳。


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