多克隆抗體的免疫電泳實驗

分類  >  電泳槽 >
tags:    時間:2014-03-11 18:40:20
多克隆抗體的免疫電泳實驗簡介
    多克隆抗體的免疫電泳實驗   【實驗原理】 免疫電泳又稱為γ球蛋白電泳或免疫球蛋白電泳技術,這是一種能夠判斷血液中三種免疫球蛋白IgM'' I……
多克隆抗體的免疫電泳實驗正文
    
多克隆抗體的免疫電泳實驗
 
【實驗原理】
免疫電泳又稱為γ球蛋白電泳或免疫球蛋白電泳技術,這是一種能夠判斷血液中三種免疫球蛋白IgM'' IgG'' IgA含量水平的實驗方法。在這項實驗技術中,首先利用蛋白質的分子量和所帶電荷的比值運用水平瓊脂糖凝膠電泳技術將蛋白質進行分離,然後將特異性的抗體引入到與電泳方向平行的凹槽中,在抗原和抗體的擴散過程中,抗原和抗體適當比例的結合會導致沉澱的產生(如圖)。0.85%鹽不僅可以終止擴散過程也可用於洗去未結合的蛋白,抗原和抗體結合所形成的沉澱線即可以肉眼觀察也可利用染色方法觀察。
 
免疫電泳技術不僅可用於血清或尿樣中單克隆抗體的鑒定,也可用於其它方面,比如免疫複合物的篩選、各種異常丙種球蛋白血症的識別和鑒定等。免疫電泳技術也是進行蛋白質常規評價的一種可靠,精確的實驗方法,可觀察蛋白質結構的變化和濃度的改變。
 
【實驗材料】
⒈ 實驗器材
水平電泳儀;打孔器;滴管;刀片;電源;水浴(55°C);蒸餾水;燒杯(400-600ml);
加樣槍(5-100ul)。
⒉ 實驗試劑
⑴ 純化的抗體;蛋白質混合物;1%瓊脂。
⑵ Tris-巴比妥緩衝溶液:2.24g 巴比妥酸,4.43g Tris,0.053g 乳酸鈣及0.065g 疊氮化鈉溶於100ml 蒸餾水中。
⑶ 電泳緩衝溶液:將Tris-巴比妥緩衝溶液與蒸餾水按1:4的比例混合。
 
【實驗方法】
⒈ 準備瓊脂糖凝膠
將瓊脂和電泳緩衝溶液混合放入90°C水浴加熱至溶化,製成1%瓊脂,將瓊脂在冷卻前鋪在水平玻璃板上,待冷卻至室溫后,按圖用內徑4毫米的打孔器打孔及製作凹槽。
⒉ 電泳
將用電泳緩衝溶液稀釋的4%-5%的抗原用滴管小心放入小孔中,將膠板放入電泳槽中並用潤濕的濾紙將膠板和電泳槽中的緩衝溶液相連。蓋上電泳槽蓋,接通電源,6V/cm通電至前沿移動約35mm,時間約為1小時,利用示蹤染料判斷移動距離。
⒊ 擴散
將膠板移出電泳槽並放在水平位置上''用濾紙潤干膠板凹槽中的緩衝溶液''在凹槽中加入適量的抗體(0.2ml~0.25ml),注意抗體不能溢出凹槽以避免污染.將膠板移至含有疊氮化鈉且有一定濕度的盒內''加蓋密封后在30°C水浴擴散至少10小時后,移至0.85%鹽水中以終止擴散並洗去未結合的蛋白。
 
【實驗結果】
觀察抗原和抗體之間所形成的沉澱線,並進行記錄。
Bookmark the permalink ,來源:
One thought on “多克隆抗體的免疫電泳實驗