生化分析儀基本測定方法與原理
(一):終點法
根據反應達到平衡時反應產物的吸收光譜特徵及其吸光度大小,對物質進行定量分析的方法。對一般化學反應來說,反應完全(或正、逆反應動態平衡)、反應產物穩定時為反應終點。對抗原一抗體反應來說,是抗原和抗體完全反應、形成最大且穩定的免疫複合物時為終點。在反應時間進程曲線上為與x軸平行線區段。
(二):連續監測法
又稱速率法。即連續監測反應過程,根據所測定的產物生成或底物消耗的速度進行定量分析的方法。在反應時間進程曲線上為反應呈恆速區段(斜率保持不變),常用於酶活性線性反應期測定。
(三):空白校正
在分光光度法中,常利用空白溶液來調節儀器的吸光度零點,或用來抵消某些測定的干擾因素。在生化分析儀測定中,除了採用雙或多波長、兩點法等排除背景干擾外,常要運用專門空白測定,以便從樣品測定吸光度中扣除其影響。正確選擇空白校正,對提高準確度起重要作用。
1.試劑空白一般在方法類型和校準模式中,即分為有或無試劑空白兩大類。
試劑空白單獨測定或與校準配合測定,並需預選裝載去離子水樣品杯或試劑空白架。校準或病人樣品的各測定點吸光度,均要扣除相應測定點的試劑空白吸光度或空白速率值。無試劑空白的方法,多直接以反應杯的水空白作為測定基準值。
在不少儀器中,試劑空白測定類似校準測定,並非在病人樣品測定時實時測定。所以,要注意它的測定頻率,避免因試劑批號或質量的變化造成試劑空白的改變引起的計算誤差。
2.樣品空白
主要為了消除樣品本身混濁或色度的干擾。常採用空白通道法,測定校正結果=顯色反應通道結果-空白通道結果。多數儀器須另外佔用測定通道,分析速度減半,但去干擾的準確性應高於兩點終點法。