液相色譜儀的基本原理應用及常見故障

tags:    時間:2014-03-11 12:13:25
液相色譜儀的基本原理應用及常見故障簡介
       液相色譜儀的基本原理應用及常見故障  高效液相色譜儀的應用高效液相色譜法只要求樣品能製成溶液,不受樣品揮發性的限制,流動相可選擇的範圍寬,固定相的……
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液相色譜儀的基本原理應用及常見故障


高效液相色譜儀的應用高效液相色譜法只要求樣品能製成溶液,不受樣品揮發性的限制,流動相可選擇的範圍寬,固定相的種類繁多,因而可以分離熱不穩定和非揮發性的、離解的和非離解的以及各種分子量範圍的物質。


與試樣預處理技術相配合,HPLC所達到的高解析度和高靈敏度,使分離和同時測定性質上十分相近的物質成為可能,能夠分離複雜相體中的微量成分。隨著固定相的發展,有可能在充分保持生化物質活性的條件下完成其分離。


HPLC成為解決生化分析問題最有前途的方法。由於HPLC具有高解析度、高靈敏度、速度快、色譜柱可反覆利用,流出組分易收集等優點,因而被廣泛應用到生物化學、食品分析、醫藥研究、環境分析、無機分析等各種領域。高效液相色譜儀與結構儀器的聯用是一個重要的發展方向。


液相色譜-質譜連用技術受到普遍重視,如分析氨基甲酸酯農藥和多核芳烴等;液相色譜-紅外光譜連用也發展很快,如在環境污染分析測定水中的烴類,海水中的不揮發烴類,使環境污染分析得到新的發展。


高效液相色譜儀常見故障處理LC-10AT高效液相色譜儀是日本島津公司1996年的產品,檢測器為可變波長紫外檢測器,色譜柱為島津公司的ODS-C18,大連依利特的ODS-C18。


八年的日常工作中遇到了幾種故障,如故障1經諮詢島津公司的工程師后,得以解決;故障2、故障5是頻繁碰到的問題等,特作總結如下:故障1流動相內有氣泡,關閉泵,打開泄壓閥,打開purge鍵,清洗脫氣,氣泡不斷從過濾器冒出,進入流動相,無論打開purge鍵幾次,都無法清除不斷產生的氣泡。


原因過濾器長期沉浸於乙酸銨等緩衝液內,過濾器內部由於黴菌的生長繁殖,形成菌團,阻塞了過濾器,緩衝液難以流暢地通過過濾器,空氣在泵的壓力作用下經過濾器進入流動相。


處理過濾器浸泡於5%硝酸溶液中,超聲清洗幾分鐘即可;亦可將過濾器浸泡於5%硝酸溶液中12~36小時,輕輕震蕩幾次,再將過濾器用純水清洗幾次,打開泄壓閥,打開purge鍵,清洗脫氣,如仍有氣泡不斷從過濾器冒出,繼續將過濾器浸泡於5%硝酸溶液中,如沒有氣泡不斷從過濾器中冒出,說明過濾器內部的黴菌菌團已被硝酸破壞,流動相可以流暢地通過過濾器。打開泄壓閥,打開泵,流速調至1.0~3.0ml/min,純水沖洗過濾器1小時左右。即可將過濾器清洗乾淨。關閉泄壓閥,純甲醇沖洗半小時即可。


故障2柱壓高原因(1)緩衝液鹽分如(乙酸銨等)沉積於柱內;(2)樣品污染沉積。


處理對於第一種情況先用40~50℃的純水,低速正向沖洗柱子,待柱壓逐漸下降后,相應提高流速沖洗,柱壓大幅度下降后,用常溫純水沖洗,之後用純甲醇沖洗柱子30分鐘;對於第二種情況,由樣品的沉積引起污染的C18柱,和純水反向沖洗柱子,然後換成甲醇沖洗,接著用甲醇異丙醇(4 6)沖洗柱子(沖洗時間的長短由樣品污染的情況而定),再用換成甲醇沖洗,然後用純水沖洗,最後甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。


故障3既無壓力指示,又無液體流過[1>。


原因(1)泵密封墊圈磨損;(2)大量氣泡進入泵體。


處理對於第一種情況,更換密封墊圈;對於第二種情況,在泵作用的同時,用一個50ml的玻璃針筒在泵的出口處幫助抽出空氣。


故障4壓力波動大,流量不穩定.原因系統中有空氣或者單向閥的寶石球和閥座之間夾有異物,使得兩者不能密封。


處理工作中注意觀察流動相的量,保證不鏽鋼濾器沉入儲液器瓶底,避免吸入空氣,流動相要充分脫氣[2>。如為單向閥和閥座之間夾有異物,拆下單向閥,放入盛有丙酮的燒杯用超聲波清洗.故障5出峰不佳,峰分叉。


原因(1)色譜柱被污染;(2)柱頭填料塌陷。


處理對於第一種情況,先用純水反向沖洗柱子,然後換成甲醇沖洗,接著用甲醇異丙醇(4 6)沖洗柱子(沖洗時間的長短由樣品污染的情況而定),再換成甲醇沖洗,然後用純水沖洗,最後甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。如沖洗后依然出峰不佳,則考慮第二種情況。對於第二種情況,擰開柱頭,檢查柱填料是否硬結或塌陷。去除硬結部分(污染的填料),裝入新填料,滴一滴甲醇,填料下陷,再填,用與柱內徑相同的頂端平滑的不鏽鋼桿壓緊,再填平,滴甲醇,再壓緊反覆幾次,直至裝滿填平[2>。柱頭用甲醇沖洗乾淨,擦凈柱外壁的填料,擰緊柱頭,用純甲醇沖洗30分鐘以上。


故障6峰面積重複性不佳。


原因(1)進樣閥漏液;(2)加樣針不到位。


處理對於第一種情況更換進樣閥墊圈;對於第二種情況保證加樣針插到底,注射樣品溶液后須快速、平穩地從LOAD狀態轉換到INJECT狀態,以保證進樣量的準確。日常工作中,液相色譜儀的保養非常重要,如要注意不要讓空氣進入輸液系統和高壓泵中,儲液器內的溶液如長時間未用應清洗儲液器並更換溶液,每次用完色譜儀后緩衝液要用純水沖洗乾淨,防止無機鹽析出或沉積;樣品的前處理也很重要,任何樣品都要儘可能地去除雜質,完全溶解,盡量減少對色譜柱的污染,以延長色譜柱的使用壽命,同時避免注射過濃的樣品溶液,以免殘留液在進樣閥內析出固體引起堵塞;色譜柱作好標記,用於不同分析目的的色譜柱不要混用等。


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